食品添加劑琥珀酸單甘油酯

附　錄　A 

檢驗方法

A.1　 一般規定

除非另有說明 ，在分析中僅使用確認為分析純的試劑和GB/T 6682中規定的三級水 。

試驗方法中所用標準滴定溶液 、雜質測定用標準溶液、製劑及製品 ，在沒有注明其他要求時 ，均按GB/T 601 、GB/T 602和GB/T 603之規定製備 。試驗中所用溶液在未注明用何種溶劑配製時 ，均指水溶液 。

A.2　鑒別試驗

A.2.1 溶解性

溶於溫甲醇 ，乙醇和正丙醇 。

A.2.2 脂肪酸試驗

A.2.2.1　試劑和材料

A.2.2.1.1　己烷 。

A.2.2.1.2　氫氧化鉀乙醇溶液 ：28g/L 。

A.2.2.1.3　鹽酸溶液 ：226→1000 。

A.2.2.2  分析步驟

稱取1g樣品 ，與15mL氫氧化鉀乙醇溶液加熱回流1h 。加15mL水 ，用約6mL鹽酸溶液酸化 ，有油滴或白至黃白色固體產生 ，它可溶於5mL己烷中 。分出己烷層 ，再用5mL己烷萃取一次 ，合並己烷萃取液 ，蒸發至幹 。所得脂肪酸用氣相色譜法鑒別 ，試驗結果呈陽性 。全部操作應在通風櫥中進行 。

A.2.3 琥珀酸試驗

A.2.3.1　試劑和材料

A.2.3.1.1　鋅粉 。

A.2.3.1.2　氯化銨溶液 ：5g/L 。

A.2.3.1.3　濾紙 ：用含5%對二甲基氨基苯甲醛和20%三氯乙酸的苯溶液潤濕 。

A.2.3.2　分析步驟

以A.2.2.2中水層液作為試樣溶液 ，取1滴試樣溶液 ，加入微量試管中 ，加1滴氯化銨溶液和鋅粉數mg。取一片濾紙覆蓋試管口 。用微火焰持續加熱試管底部約1min 。視琥珀酸含量的不同 ，濾紙上應顯現紅紫色或粉紅色斑點 。

A.2.4 丙三醇試驗

A.2.4.1　試劑和材料

A.2.4.1.1　食品級氫氧化鈣 。

A.2.4.1.2　硫酸氫鉀 。

A.2.4.1.3　氫氧化鈉溶液 ：43g/L 。

A.2.4.1.4　濾紙 ：用丙烯醛鑒別試劑（5%五氰基亞硝基高鐵酸二鈉水溶液和20%呱啶水溶液 ，臨用前按1:1配製）潤濕 。

A.2.4.2  分析步驟

以A.2.2.2中水層液作為試樣溶液 ，取5mL該試樣溶液 ，移入試管中 ，加過量的食品級氫氧化鈣 ，置於沸水中5min ，期間振搖若幹次 ，冷卻後過濾 。取該濾液1滴 ，放於試管內 ，加約50mg硫酸氫鉀 。取一片濾紙覆蓋試管口。用微火焰持續加熱試管底部 。濾紙應呈現藍色 ，表明存在丙三醇 。加氫氧化鈉溶液後 ，則轉變成淡紅色 。

A.3　酸值的測定

A.3.1 試劑和材料

A.3.1.1　乙醇 ：中性 ，用氫氧化鈉溶液中和 。

A.3.1.2　氫氧化鈉標準滴定溶液 ：c（NaOH）=0.1mol/L 。

A.3.1.3　酚酞指示液 ：10g/L 。

A.3.2 分析步驟

稱取0.1g樣品 ，精確至0.0002g ，溶於50mL乙醇中 ，加1mL酚酞指示液 ，用氫氧化鈉標準滴定溶液滴定至微紅色 ，保持10s不褪色為終點 。

A.3.3 結果計算

酸值（以KOH計）w1, 數值以毫克每克（mg/g）表示 ，按公式(A.1)計算 ：

              …………………………(A.1)

   式中 ：

V——氫氧化鈉標準滴定溶液的體積的數值 ，單位為毫升(mL) ；

c —— 氫氧化鈉標準滴定溶液濃度的準確數值 ，單位為摩爾每升(mol/L) ；

m ——樣品質量的數值 ，單位為克(g) ；

M ——氫氧化鉀的摩爾質量的數值 ，單位為克每摩爾(g/mol) [M=56.109] 。

A.4　羥值的測定

A.4.1 試劑和材料

A.4.1.1　吡啶 ：以酚酞為指示劑 ，用鹽酸溶液（1+110）中和。

A.4.1.2　中性正丁醇 ：以酚酞為指示劑 ，用氫氧化鉀乙醇標準滴定溶液滴定 ，至出現粉紅色且保持15s不變色 。

A.4.1.3　乙酰化劑 ：乙酸酐與吡啶按1+3混勻 ，貯存於棕色瓶中 。

A.4.1.4　氫氧化鉀-乙醇標準滴定溶液 ：c(KOH)=0.5mol/L 。

A.4.1.5　酚酞指示液 ：10g/L 。

A.4.2 分析步驟

稱取約2g樣品 ，精確至0.000 1g ，置於250mL磨口錐形瓶中 ，加入5mL±0.02mL乙酰化劑 ，連接冷凝管 ，在水浴上加熱回流1h 。從冷凝管上端加入10mL水於錐形瓶中 ，繼續加熱10min後 ，冷卻至室溫 。用15mL中性正丁醇衝洗冷凝管 ，拆下冷凝管 ，再用10mL中性正丁醇衝洗瓶壁 。加入8滴酚酞指示液 ，用氫氧化鉀-乙醇標準滴定溶液滴定至溶液呈粉紅色即為終點 。同時進行空白試驗 。

為校正遊離酸 ，稱取約10g樣品 ，精確至0.01g 。置於錐形瓶中 ，加入30mL吡啶 ，加入5滴酚酞指示液 ，用氫氧化鉀-乙醇標準滴定溶液滴定至溶液呈粉紅色 。

A.4.3 結果計算

羥值以w2 計,數值以毫克每克（mg/g）表示 ，按式(A.2)計算:

         …………………………(A.2)

  式中 ：

V1  ——樣品消耗氫氧化鉀乙醇標準滴定溶液體積的數值,單位為毫升(mL) ；

V0 ——空白試驗消耗氫氧化鉀乙醇標準滴定溶液體積的數值,單位為毫升(mL) ；

V2——校正遊離酸消耗氫氧化鉀乙醇標準滴定溶液體積的數值,單位為毫升(mL) ；

c ——氫氧化鉀乙醇標準滴定溶液濃度的準確數值 ，單位為摩爾每升(mol/L) ；

m3 ——樣品質量的數值 ，單位為克(g) ；

m0——校正遊離酸測定時樣品質量的數值 ，單位為克（g） ；

M —— 氫氧化鉀的摩爾質量的數值 ，單位為克每摩爾(g/mol) [M=56.109] 。

A.5　碘值的測定

A.5.1 試劑和材料

A.5.1.1　一氯化碘 。

A.5.1.2　韋氏溶液 ：所有物料和玻璃器皿均需幹燥 ，取19.00g一氯化碘 ，溶於700mL乙酸和300mL四氯化碳配成的混合液1000mL中 。如溶液不澄清 ，過濾 。貯存於陰涼暗處 。

A.5.1.3　四氯化碳 。

A.5.1.4　碘化鉀溶液 ：100g/L 。

A.5.1.5　硫代硫酸鈉標準滴定溶液 ：0.1mol/L 。

A.5.1.6　澱粉指示液 ：10g/L 。

A.5.2 分析步驟

稱取0.5g樣品 ，精確至0.000 1g ，置於碘量瓶中 ，加入10mL四氯化碳 ，再用移液管吸入韋氏溶液25mL 。搖勻 。塞緊塞子 ，與陰涼（20～25℃）暗處放置30min 。加碘化鉀溶液15mL和水100mL 。 然後在強烈搖動下用硫代硫酸鈉標準滴定溶液滴定至黃色接近消失 ，加澱粉指示液1～2mL ，並繼續滴定至藍色消失為止 。同時進行空白試驗 。

A.5.3 結果計算

碘值以w3 計, 以碘計 ，數值以克每百克（g/100g）表示 ，按式(A.3)計算:

          …………………………(A.3)

  式中 ：

V3——空白試驗消耗硫代硫酸鈉標準滴定溶液體積的數值,單位為毫升(mL) ；

V4——試驗溶液消耗硫代硫酸鈉標準滴定溶液體積的數值,單位為毫升(mL) ；

c ——硫代硫酸鈉標準滴定溶液濃度的準確數值 ，單位為摩爾每升(mol/L) ；

m ——試料質量的數值 ，單位為克(g) 。

A.6　遊離琥珀酸 、結合琥珀酸的測定

A.6.1 試劑和材料

A.6.1.1　苯 。

A.6.1.2　氫氧化鈉甲醇標準滴定溶液 ：c(KOH)=0.02mol/L 。溶解4g氫氧化鈉於1000mL無水甲醇中 ，移取200mL該溶液至1000mL容量瓶中 ，用無水甲醇稀釋並定容 ，搖勻 。以酚酞為指示劑 ，琥珀酸以幹基計標定該溶液 。

A.6.1.3　酚酞指示液 ：10g/L 。

A.6.2 分析步驟

稱取約125mg樣品 ，精確至0.000 1g ，置於盛有100mL苯的250mL分液漏鬥中 ，用溫水加熱分液漏鬥使樣品溶解 ，作為試樣溶液 。置100mL苯於另一個分液漏鬥中 ，作為空白溶液 。然後均按如下方式處理 ：冷卻漏鬥中的物質 ，加50mL水 ，翻轉漏鬥約20次，使之混勻 。靜置15min後移取水層至125mL的錐形瓶中 ，向分液漏鬥中加10mL水 ，翻轉漏鬥5次 ，將洗液倒入125mL錐形瓶中 。於錐形瓶中加入5滴酚酞指示液 ，用氫氧化鈉甲醇標準滴定溶液滴定 。對空白溶液做同樣處理 ，並記錄淨耗用體積 ，單位為mL ，以V1表示 。

將苯層移入500mL圓底燒瓶中 ，用10mL苯洗滌漏鬥 。在燒瓶中加入幾顆沸石 ，在約60℃和部分真空下蒸發苯 ，最好使用薄膜蒸發器 ，用10mL甲醇溶解燒瓶中的殘渣 ，加10mL水和5滴酚酞指示液 ，用氫氧化鈉甲醇標準滴定溶液滴定 。對空白溶液做同樣處理 ，並記錄淨耗用體積 ，單位為mL ，以V2表示 。

A.6.3 結果計算

遊離琥珀酸的質量分數以w4 計, 數值以%表示 ，按公式(A.4)計算:

          …………………………(A.4)

式中：

V1 ——試驗淨消耗氫氧化鈉甲醇溶液體積的數值,單位為毫升(mL) ；

c ——氫氧化鈉甲醇標準滴定溶液濃度的準確數值 ，單位為摩爾每升(mol/L)；

m ——樣品質量的數值 ，單位為毫克(mg) 。

結合琥珀酸的質量分數以w5 計, 數值以%表示 ，按式(A.5)計算:

          …………………………(A.5)

式中 ：

V2  ——試驗淨消耗氫氧化鈉甲醇溶液體積的數值,單位為毫升(mL) ；

c ——氫氧化鈉甲醇標準滴定溶液濃度的準確數值 ，單位為摩爾每升(mol/L) ；

m ——樣品質量的數值 ，單位為毫克(mg) 。